Календарь статей
«    Ноябрь 2017    »
ПнВтСрЧтПтСбВс
 12345
6789101112
13141516171819
20212223242526
27282930 
Архив статей
Ноябрь 2017 (2)
Октябрь 2017 (11)
Сентябрь 2017 (6)
Август 2017 (5)
Июль 2017 (4)
Июнь 2017 (8)


Яндекс.Метрика

Получение предварительной и чистой культуры гриба

Метод заливки. В природных условиях грибные организмы находятся в большинстве случаев в сильно загрязнённом состоянии; для отделения одних организмов от других пользуются методом разливки, применяя следующие предварительные приёмы. Среда разогревается или в водяной бане или — если это, например, желатиновая среда — в стакане с горячей водой. После того, как произойдёт разжижение, среде дают охладиться до температуры 40 °С. Если сразу производят большой посев, то пробирки не надо все сразу вынимать из водяной бани.
Часть поверхностного поражения стерильным скальпелем слегка соскабливают или на стерильное стекло или в разжиженный агар в пробирку. Иглой, перед этим прокалённой, слегка дотрагиваются до питательной среды для увлажнения и переносят соскобленную часть в жидкую среду. Иглу слегка встряхивают после этого, закрыв пробирку пробкой, начинают вращать её между ладонями для того, чтобы мицелий отделился от спор и последние разошлись в жидкости. Среду для предварительной культуры гриба надо брать кислую во избежание засорения бактериями. Затем из пробирки выливают жидкую среду с разболтанным в ней инокулюмом в стерилизованную чашку Петри, вынутую из бумаги в последнюю минуту перед посевом. При выливании жидкости из пробирки надо с одной стороны приподнять верхнюю чашку во избежание попадания спор из воздуха и осторожным вращением жидкость распределить по всей поверхности чашки Петри, стараясь не загрязнить верхней чашки. После этого чашки ставят на горизонтальную поверхность для застывания. Агар застывает очень быстро, желатиновые среды — медленно. Для ускорения затвердевания рекомендуется чашки ставить на какую-нибудь холодную поверхность. На чашках подписывается название гриба, число и месяц посева, а иногда помечается и количество высеваемых чашек для каждого гриба. Чашки после того, как они застынут, заворачивают в лимонную или пергаментную бумагу, в которой они ранее стерилизовались, и ставят в термостат при нужной температуре (обычно 20-25 °С). Co следующего дня начинают вести наблюдения над появляющимся ростом колонии. С помощью микроскопа, повернув чашку нижней стороной к объективу, пользуются малым увеличением микроскопа и наблюдают за ростом и характером колоний. Затем приступают к пересеву колонии из чашки Петри в пробирки с питательной средой. Для первоначальных пересевов грибов лучшей средой из-за её прозрачности является желатиновая среда, а в тёплое время — агаровая. Если рост колонии только начинается и они ещё очень маленькие, их стерильной иглой снимают целиком и переносят в пробирку с наклонной средой. Если колонии уже развиты, снимают часть колоний или же, осторожно прикоснувшись к колонии, на кончике иглы переносят инфекционное начало в пробирку. На всех чашках, с которых сделаны пересевы, с обратной стороны в тех местах, где взят материал для посева, делаются отметки карандашом. На следующий день делается вторичное наблюдение, и опять производится пересев и отметка колоний. Вторичные и дальнейшие просмотры делаются потому, что не все споры прорастают в одно время, так как есть грибы, которые отличаются большой медленностью прорастания спор. Чашки держать под наблюдением больше 8 дней не рекомендуется, так как они быстро загрязняются из воздуха или самосевом. Часто, несмотря на все принятые предосторожности, в перенесённой в пробирку культуре начинают расти два или несколько организмов. В этом случае для разделения их пользуются или методом разливки, как в предыдущем случае, или же приступают к выделению из одной споры.
СХЕМА ИЗОЛЯЦИИ ГРИБОВ МЕТОДОМ РАЗЛИВКИ
1. Разжижение среды в пробирке с помощью водяной бани.
2. Внесение инфекционного начала в разжиженные пробирки следующим методом:
а) прогревание пробирки на огне в месте соединения пробирки со стеклом,
б) прокаливание иглы,
в) взятие инфекционного начала,
г) перенесение его в пробирки со средой,
д) взбалтывание,
е) прокаливание иглы
3. Выливание в чашку Петри среды из пробирки.
4. Наблюдение за ростом колоний.
5. Пересев отдельных колонии.