Календарь статей
«    Ноябрь 2017    »
ПнВтСрЧтПтСбВс
 12345
6789101112
13141516171819
20212223242526
27282930 
Архив статей
Ноябрь 2017 (2)
Октябрь 2017 (11)
Сентябрь 2017 (6)
Август 2017 (5)
Июль 2017 (4)
Июнь 2017 (8)


Яндекс.Метрика

Выделение грибов из растений

Семена. Важность экспертизы семян, являющихся во многих случаях передатчиками инфекции, вполне ясна. Ho чтобы произвести правильную оценку болезней семян, нельзя ограничиться только экспертизой семян, производимой центрифугированием и микроскопическим анализом, а надо также произвести анализ их в культурах на питательной среде. Это делается с целью вызвать плодоношение у бесплодной стадии грибницы, по которой нельзя вести определение.
Для экспертизы из мелких проб составляют общую пробу, которую тщательно перемешивают, затем из неё берут среднюю пробу в количестве 200 штук семян. Из этой средней пробы 25 штук размещают с помощью стерилизуемого перед взятием каждого семени пинцета на уже застывший питательный агар в чашки Петри. Также поступают и с остальными семенами средней пробы. При этом, если целью изучения является обнаружение поверхностных грибов,семена не подвергаются дезинфекции; если же целью является изучение грибов находящихся внутри семени, то перед раскладыванием семян, которое также, как и в первом случае производится стерильным пинцетом, их дезинфицируют или в марганцево-кислом калии или на одну минуту погружают в чистый спирт (95 %), потом быстро промывают в стерильной воде и выкладывают на стерилизованную фильтровальную бумагу для высушивания. После этого уже высохшие семена раскладываются в чашки Петри, которые ставятся в термостат с температурой 22-25 °С. Наблюдение начинается с 3-4-го дня, когда около семени начинает развиваться грибница, которая по мере роста стерильной платиновой иглой переносится в пробирки с косым агаром, на котором выращивается и определяется. Если культура не особенно чиста и определение затруднено, она очищается методом разливки.
Иногда для более лёгкого обнаружения скрытой грибницы семена, предварительно продезинфицированные, разрезаются скальпелем на две части и потом проращиваются.
Проращивание склероциев, иногда сопровождающих семена, производится следующим образом: склероции дезинфицируют в 95% спирте в течение 10 минут, и затем стерильной бритвой из них делаются тонкие срезы, которые помещаются в чашки Петри или в пробирки с питательным агаром.
Хорошие результаты даёт проращивание семян на стерилизованном песке, главным образом, тех из них, кожура которых уже сама по себе является питательной средой.
Чаще проращивание семян производится на фильтровальной бумаге следующим методом: вырезают по два кружка фильтровальной бумаги для каждой чашки Петри, на 1 см размером больше, чем дно крышки. Эти кружки вкладываются в верхнюю и нижнюю часть крышки, а потом чашки стерилизуются обычным способом. После стерилизации чашки сверху и снизу увлажняются стерильной водой, после чего на них производят раскладывание и проращивание семян обычным способом. По мере высыхания бумаги к ней добавляется стерильная вода. Иногда при изучении грибов, находящихся на поверхности, чтобы они не угнетали друг друга, развиваясь около одного семени, заражённого разными грибами, несколько семян вкладываются в пробирку, наполненную дистиллированной водой, и встряхиваются. Потом осторожно вода с разболтанными в ней спорами грибов наливается на застывший в чашке агар и сразу же сливается. Этот способ даёт возможность спорам гриба, отделившимся от семени, развиться самостоятельно в чашках Петри.
СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ МИКОФЛОРЫ СЕМЯН
1. Получение средней пробы.
2. Выделение грибов, находящихся снаружи семени:
а) проращиванием семян на питательной среде,
б) проращиванием семян на фильтровальной бумаге,
в) проращиванием семян на стерилизованном песке.
3. Выделение грибов, находящихся внутри семени:
а) проращиванием дезинфицируемых семян на питательной среде,
б) проращиванием срезов с семян на питательной среде.
Стебли и корни. Поражения стеблей бывают как наружные, так и внутренние, когда грибы, попадая в растение через механические повреждения корневой системы, оттуда распространяются по сосудистой системе. При выделении наружных повреждений пользуются методом разливки; при внутренних — корни и стебли тщательно вымывают, протирают, опускают в чистый спирт, прожигают на пламени спиртовки, затем делают поперечные или продольные срезы бритвой, т.к. при заболевании корней чаще всего поражается сосудистая система, или расщепляют иглами материал вдоль, положив его на стеклянную стерилизованную пластину, и проращивают на застывшей питательной среде в чашках Петри. Иногда для выделения грибов с корней последние после промывания водой разрезают на кусочки длиной 1-2 см, снимают кору и на несколько секунд погружают в 95 % спирт, затем промывают в стерильной воде и, погрузив в чистый спирт, прожигают на пламени спиртовки.
СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ МИКОФЛОРЫ СТЕБЛЕЙ
1. Выделение поверхностного поражения методом разливки.
2. Выделение внутреннего поражения методом проращивания поперечных и продольных срезов на питательной среде.
Листья. Болезни листьев, вызываемые грибами, чаще всего выражаются в пятнах различного цвета: белых, серых, коричневых, тёмных и т. д. Выделение наружных повреждений производится методом разливки путём соскабливания внешнего поражения или проращивания грибницы во влажной камере. Для этого берут исследуемый материал, помещают его в стерильную посуду, дно которой увлажняют стерильной водой. Это делается с целью изолирования материала от внешнего заражения и для лучшего развития грибницы и спор, которые по мере развития переносятся на питательную среду.
При внутренних повреждениях небольшую часть листа с поражением вырезают, кладут в спирт на 1-3 секунды, промывают в воде, расщепляют стерильными иглами и проращивают на питательной среде.
СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ МИКОФЛОРЫ ЛИСТЬЕВ
1. Выделение наружного повреждения методом разливки.
2. Выделение внутреннего повреждения методом расщепления поражённой части листа и проращивание её на питательной среде.