Календарь статей
«    Июль 2017    »
ПнВтСрЧтПтСбВс
 12
3456789
10111213141516
17181920212223
24252627282930
31 
Архив статей
Июль 2017 (1)
Июнь 2017 (8)
Май 2017 (9)
Апрель 2017 (6)
Март 2017 (2)
Февраль 2017 (9)


Яндекс.Метрика

Методы создания искусственных инфекционных фонов

Искусственный инфекционный фон создают, учитывая индивидуальные биологические особенности каждой болезни. Инокуляцию проводят различными способами, но предпочтение отдают способам без травмирования растений.
При проверке лечебного действия испытываемых фунгицидов в первую очередь проводится инокуляция растений, а затем через 3-4 дня опрыскивание фунгицидами. При проверке действия профилактических обработок инокулируют растение на следующий день после проведения опрыскивания. Искусственный инфекционный фон создается несколькими способами в зависимости от объекта, против которого испытываются фунгициды.
Фоны белой и серой гнилей создают культурой возбудителей болезней, выращенной на стерилизованных семянках подсолнечника или овса. Семянки подсолнечника или зерновки овса замачивают в воде на 12-15 часов, затем засыпают в колбы Эрленмеиера на 2/3 объёма. Стерилизуют текучим паром методом тиндализации (2 раза по 1,5 часа через сутки).
Стерилизованные семянки или овёс в колбах инокулируют мицелием возбудителя, выращенном на агаре в чашках Петри или кусочками поражённых тканей подсолнечника с мицелием. Для равномерного зарастания питательной среды колбы ежедневно встряхивают. Выращивание культуры осуществляют при 20-25°С, для заражения используют 10-15-дневную культуру. Фон создают одновременно с посевом подсолнечника. Инфекционная нагрузка — 2-3 семянки или зерновки с мицелием на 1 гнездо.
Аналогичным способом можно создавать инфекционный фон для пепельной гнили и фузариозов. Искусственную инокуляцию подсолнечника фомопсисом осуществляют в фазе бутонизации чистой культурой гриба или методом опрыскивания растений его аскоспорами. При заражении чистой культурой возбудителя болезни на стеблях, примерно на 1/3 их высоты от уровня почвы, делают неглубокие продольные надрезы ткани и препаровальной иглой вводят туда небольшие кусочки среды с 8-10- и суточной культурой гриба. На одном стебле достаточно одной точки инфекции. Место введения инокулюма покрывают влажной ватой, а затем обёртывают тонкой металлической фольгой, которая находясь на стебле определённое время, предохраняет инфекцию от внешних воздействий. При оптимальных условиях видимые симптомы болезни на инокулированных стеблях подсолнечника появляются примерно через 12-15 дней.
Для опрыскивания подсолнечника водной суспензией аскоспор используют зрелые перитеции, сформировавшиеся на перезимовавших растительных остатках или выращенные на питательной среде. Оптимальная концентрация суспензии должна быть в пределах 104 аскоспор/мл. опрыскивание растений суспензией аскоспор проводят в вечернее время. После инокуляции их следует выдержать до утра (14 часов) во влажной камере. Естественную инокуляцию подсолнечника возбудителем болезни проводят методом размещения поражённых стеблей среди опытных растении. Поражённые стебли заготавливают после созревания подсолнечника и оставляют на открытом месте для перезимовки. Весной после перехода температуры воздуха через 5 °C при сухой погоде (5 дней без осадков и средней относительной влажности воздуха не более 45 %) для стимулирования развития перитециев гриба на перезимовавших стеблях их следует периодически равномерно увлажнять.
Максимально инфицированные части стеблей, на которых сформировалось наибольшее количество перитециев, размещают в посевах подсолнечника в фазе 3-4 настоящих листьев из расчёта: один отрезок поражённого стебля размером 15 см на один погонный метр посева. Для создания оптимальных условий заражения подсолнечника аскоспорами возбудителя болезни рекомендуется при засушливой погоде до смыкания рядков подсолнечника периодически обильно опрыскивать посевы водой.
Заражение подсолнечника фомозом проводят суспензиеи пикноспор.
Культура гриба выращивается на сусловом агаре в чашках Петри. На 8-9 день мицелий соскабливается скальпелем, добавляется вода. Полученную суспензию тщательно перемешивают и фильтруют через 3-4 слоя марли. Далее титр суспензии доводят до 500 тыс. спор в 1 мл. Инокуляция подсолнечника проводится в фазу образования 10 листьев.
Оценка фунгицидов против ложной мучнистой росы проводится при искусственном заражении в условиях теплицы и поля.
В условиях теплицы осуществляется предварительная оценка фунгицидов в осенне-зимний период методом, разработанным Кукиным, Молдован. Живило и Панченко в 1965 г Искусственное заражение в этих условиях обеспечивает 100 %-ное заражение растений восприимчивого сорта ВНИИМК-8883, что позволяет надёжно и в короткий срок определить эффективность фунгицидов.
Для оценки семена, обработанные фунгицидами, высеваются в ящики размером 40х65х12 см. Почва для засыпки смешивается с песком в соотношении 1:1. В каждом ящике размещается 10 номеров и 1 контроль. В качестве контроля используется восприимчивый сорт ВНИИМК-8883, который располагается в ящике через 5 рядов. В рядке высевается 20 семян.
Заражение растений проводится водной суспензией зооспор в фазу всходов, при появлении на поверхности почвы подсемядольного колена проростков. Инфекционное начало накапливается на живых растениях восприимчивого сорта, заражённых ложной мучнистои росой. Суспензия зооспор готовится следующим образом. Вольные растения в фазе второй пары настоящих листьев помещаются во влажную камеру при температуре 16-18 °C с тем, чтобы вызвать у гриба спороношение. Зооспорангии с листьев смываются кисточкой в воду с температурой 13-15 °С.
Подсчитывается количество зооспорангиев (конидии) в каждой из 20 больших клеток камеры Горяева. Это количество суммируется и вычисляется среднее на 1 клетку. Так как количество больших клеток камеры 225, то путём умножения количества спор в 1 клетке на 225 определяется их общая сумма.
Установлено, что при наличии в 225 клетках камеры Горяева 50 спор концентрация равна 100000 в 1 мл. При любом другом количестве концентрации зооспорангиев концентрация вычисляется по правилам пропорции. Перед инокуляцией ящики с испытуемыми растениями не поливают водой. Через 1,5-2 часа наступает массовый выход зооспор из зооспорангиев. В колбу выливают 100 мл готовой суспензии, которая затем доливается водой до 2-х литров. Этого количества достаточно для заражения растений в 4-х ящиках. Суспензия вносится в рядки с помощью лабораторной промывалки. Необходимо, чтобы температура в момент заражения и в последующие 12 часов не поднималась выше 16°С. Инкубационный период для заражения проростков ложной мучнистой росой при температуре 22 °C составляет 8-9 дней. На девятый день ящики с заражёнными растениями обильно поливают и накрывают на 10 часов полиэтиленовой пленкой (влажная камера). Через 10-12 часов у восприимчивых растений появляется белый конидиальный налёт, по которому и оценивается иммунитет опытных растений. При этом контрольный восприимчивый сорт должен быть поражен на 100%. При отсутствии такого поражения опыт повторяется.
Сухая гниль. Культура гриба выращивается на сусловом агаре в чашках Петри. Инфекционным материалом служат кусочки мицелия и конидиеносцы со спорами, взятые с поражённой корзинки, заготовленной с лета, высушенной и хранящейся в эксикаторе, или со свежеубранной корзинки. Гриб очень быстро развивается, заполняя чашку. На седьмой день, когда головки созреют (потемнеют), кусочек культуры с агаром, размером 1,5-2 см переносятся платиновой иглой над пламенем спиртовки в колбу с твёрдой питательной средой — стерильным овсом. На десятый день культура достигает зрелости и пригодна для инокуляции.
Корзинки растений, достигшие фазы налива, опрыскиваются суспензией спор и мицелия (500000 единиц в 1 мл) возбудителя сухой гнили. На 1 корзинку расходуется 2-3 мл суспензии. После опрыскивания на корзинку надевается пергаментный пакет и завязывается, чтобы создалась влажная камера. Признаки болезни появляются на 6-10 день в зависимости от сложившихся условий. Этот способ наиболее приемлем для оценки эффективности фунгицидов.
Заразиха. Предварительная оценка подсолнечника на устойчивость к заразихе проводится в теплице вегетационным методом,разработанным академиком B.C. Пустовойтом и Л.А. Ждановым, и заключается в следующем. В сосуды вносится 1 г заразихи на 5 кг смеси почвы с песком (1:2). Используется смесь заразихи, собранной со всех районов возделывания подсолнечника. В сосуды высеваются испытываемые семена подсолнечника по 10 штук. Сосуды выдерживаются в одинаковых условиях освещения и влажности, к которым заразиха особенно чувствительна. Полив должен быть ограничен, т.к. переувлажнение снижает развитие заразихи. В зимнее время при укороченном дне необходимо досвечивание лампами дневного света. Продолжительность светового дня и интенсивность света должны соответствовать летнему дню. Температура воздуха в теплице поддерживается в пределах 25-27 °С. Подсолнечник за время вегетации 2-3 раза подкармливается, так как заразиха — облигатный паразит — лучше развивается на более жизненных растениях. Через 45 дней после всходов корни растений анализируются.
В полевых испытаниях заразиху вносят при посеве ручными сажалками в гнезда до 0,2 г или перед посевной культивацией в количестве 16 кг/га.
Степень устойчивости подсолнечника к заразихе определяется на основании двух показателей:
1. процент поражённых растений от общего числа учётных;
2. степень поражения — среднее количество цветоносов заразихи на одно поражённое растение.