Отдельные навески свежего зерна в разные фазы созревания последовательно экстрагировались растворителями по двум вариантам следующей схемы:
Вариант 1 позволяет определить обычным путем содержание глиадина и глютенина в зерне. Результаты анализа по варианту 2 дают возможность судить о том, находятся ли упомянутые белки в свободном состоянии или они связаны в комплекс подобный клейковине. В последнем случае сумма глиадина и глютенина, определяемая по данным варианта 1, должна совпадать с количеством белка, извлекаемого салицилатом (вариант 2), или быть близкой к нему, поскольку последний практически полностью растворяет клейковину. Если же белковые фракции находятся в свободном состоянии, то салициловый раствор сможет извлечь лишь глиадин, и количество азота в щелочных экстрактах обоих вариантов, должно быть приблизительно одинаковым.
Результаты этих опытов, представленные в табл. 53, показывают, что с самого раннего периода созревания зерна глиадин и глютенин не обнаруживаются в свободном состоянии, но образуют некоторый комплекс, подобный клейковине по своей растворимости в салицилате.
Это следует из равенства суммы глиадин+глютенин и количества белка, извлекаемого раствором салицилата. Такая закономерность наблюдается в течение всего периода созревания до восковой спелости, когда анализ обнаруживает небольшие количества белковых фракций не извлекаемых салицилатом. Это объясняется неполным растворением клейковины в растворе салицилата натрия, особенно ввиду больших трудностей хорошего измельчения свежего материала.
Возможно, что аминокислоты, по мере их поступления в созревающее зерно, синтезируются непосредственно в макромолекулы клейковинного белка без промежуточного образования отдельных составных частей его — глиадина и глютенина.
Таким образом, хорошо установлено, что отдельные белковые вещества, входящие в состав клейковины можно обнаружить в созревающем зерне на ранних фазах его развития во всех рассмотренных выше работах определяли глиадин и глютенин как наиболее изученные фракции клейковины, но совершенно ясно, что подобные результаты могли бы быть получены и по отношению к другим белковым фракциям клейковины.
Примером этого может служить исследование Мак-Колла (МсСаllа, 1938), проследившего за динамикой белковых веществ, растворимых и не растворимых в нормальном водном растворе йодистого калия, по ходу созревания пшеницы. Тщательно измельченное свежее зерно обрабатывалось последовательно водой и нормальным раствором йодистого калия, а затем проводилось фракционирование центрифугатов с помощью трихлоруксусной кислоты, гидролиз белковых фракций и определение содержания в них амидного и аспарагинового азота. Оказалось, что абсолютное количество небелкового азота и воднорастворимого белка мало меняется по ходу созревания, тогда как содержание указанных азотистых соединений, выраженное в процентах от общего азота зерна, стремительно снижается. В то же время количество белка, растворимого и не растворимого в йодистом калии, быстро увеличивается как по абсолютной величине, так и в процентном выражении к общему азоту пшеницы. Содержание амидного азота в двух белковых фракциях — растворимой и не растворимой в йодистом калии, а также в небелковой фракции правильно возрастает по ходу созревания зерна, а содержание аргининового азота одновременно снижается. Исходя из того, что водорастворимый белок содержит значительно меньше амидного азота, чем другие фракции, и процент его незначительно изменяется при созревании, автор приходит к заключению, что главная часть водорастворимых белков является довольно стабильной и не участвует в образовании белков клейковины (КJ-растворимые и KJ-нерастворимые белки). Последние образуются непосредственно из небелковых соединений, минуя стадию водорастворимого белка.
Вариант 1 позволяет определить обычным путем содержание глиадина и глютенина в зерне. Результаты анализа по варианту 2 дают возможность судить о том, находятся ли упомянутые белки в свободном состоянии или они связаны в комплекс подобный клейковине. В последнем случае сумма глиадина и глютенина, определяемая по данным варианта 1, должна совпадать с количеством белка, извлекаемого салицилатом (вариант 2), или быть близкой к нему, поскольку последний практически полностью растворяет клейковину. Если же белковые фракции находятся в свободном состоянии, то салициловый раствор сможет извлечь лишь глиадин, и количество азота в щелочных экстрактах обоих вариантов, должно быть приблизительно одинаковым.
Результаты этих опытов, представленные в табл. 53, показывают, что с самого раннего периода созревания зерна глиадин и глютенин не обнаруживаются в свободном состоянии, но образуют некоторый комплекс, подобный клейковине по своей растворимости в салицилате.
Это следует из равенства суммы глиадин+глютенин и количества белка, извлекаемого раствором салицилата. Такая закономерность наблюдается в течение всего периода созревания до восковой спелости, когда анализ обнаруживает небольшие количества белковых фракций не извлекаемых салицилатом. Это объясняется неполным растворением клейковины в растворе салицилата натрия, особенно ввиду больших трудностей хорошего измельчения свежего материала.
Возможно, что аминокислоты, по мере их поступления в созревающее зерно, синтезируются непосредственно в макромолекулы клейковинного белка без промежуточного образования отдельных составных частей его — глиадина и глютенина.
Таким образом, хорошо установлено, что отдельные белковые вещества, входящие в состав клейковины можно обнаружить в созревающем зерне на ранних фазах его развития во всех рассмотренных выше работах определяли глиадин и глютенин как наиболее изученные фракции клейковины, но совершенно ясно, что подобные результаты могли бы быть получены и по отношению к другим белковым фракциям клейковины.
Примером этого может служить исследование Мак-Колла (МсСаllа, 1938), проследившего за динамикой белковых веществ, растворимых и не растворимых в нормальном водном растворе йодистого калия, по ходу созревания пшеницы. Тщательно измельченное свежее зерно обрабатывалось последовательно водой и нормальным раствором йодистого калия, а затем проводилось фракционирование центрифугатов с помощью трихлоруксусной кислоты, гидролиз белковых фракций и определение содержания в них амидного и аспарагинового азота. Оказалось, что абсолютное количество небелкового азота и воднорастворимого белка мало меняется по ходу созревания, тогда как содержание указанных азотистых соединений, выраженное в процентах от общего азота зерна, стремительно снижается. В то же время количество белка, растворимого и не растворимого в йодистом калии, быстро увеличивается как по абсолютной величине, так и в процентном выражении к общему азоту пшеницы. Содержание амидного азота в двух белковых фракциях — растворимой и не растворимой в йодистом калии, а также в небелковой фракции правильно возрастает по ходу созревания зерна, а содержание аргининового азота одновременно снижается. Исходя из того, что водорастворимый белок содержит значительно меньше амидного азота, чем другие фракции, и процент его незначительно изменяется при созревании, автор приходит к заключению, что главная часть водорастворимых белков является довольно стабильной и не участвует в образовании белков клейковины (КJ-растворимые и KJ-нерастворимые белки). Последние образуются непосредственно из небелковых соединений, минуя стадию водорастворимого белка.